如何提高限制性酶切的反應效率

1、DNA純度在DNA樣品中若含有蛋白質，或沒有去除乾淨製備過程中所用的乙醇、EDTA、SDS、酚、氯仿和某些高濃度金屬離子，均會降低限制酶的催化活性，甚至使限制酶不起作用；

2、 酶切消化反應的温度DNA消化反應的温度，是影響限制內切酶活性的一個重要因素。不同的核酸內切限制酶，具有各自的最適反應温度。多數限制內切酶的最適反應温度是37攝氏度，少數限制性內切酶的最適反應温度高於或低於37攝氏度；

3、DNA的分子結構DNA分子構型對核酸內切限制酶的活性有很大影響，如消化超螺旋的DNA比消化線性DNA用酶量要高出許多倍。有些限制酶在消化它們自己的處於不同部位的限制位點，其效率也有明顯差異。限制性內切酶反應的終止，通常是採用65攝氏度條件下温浴5分鐘。