簡述PCR技術操作步驟

原理：

DNA聚合酶鏈式反應技術簡稱PCR技術，是一種以模板DNA為基礎，在引物和4種脱氧核糖核苷酸存在的條件下，利用DNA聚合酶的酶促反應，完成對模板的目的片段的快速擴增的過程。

步驟為：

(1)變性：雙鏈DNA在94℃條件下，通過熱變性使模板的雙鏈DNA氫鍵斷裂變成單鏈。

(2)復性：當變性温度突然降至引物Tm值(通常為35～65℃)以下時，會使引物與模板DNA互補序列雜交。由於引物一般由10～25個鹼基序列，模板DNA結構遠比引物分子複雜，且反應體系中引物分子的濃度又遠大於模板DNA，故在退火温度時，引物與模板DNA容易結合形成互補鏈。

(3)延伸：在DNA聚合酶的作用下，以DNA為模板和以4種脱氧核糖核苷酸為原料，在Mg2+存在的條件下。DNA聚合酶依賴於其5'→3'的聚合酶活力，以引物結合於DNA模板鏈為起始點。使引物的序列得以延伸，合成模板DNA的互補鏈。